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PicoGreen
  • 产品货号:
    DE-P2023
  • 中文名称:
    PicoGreen
  • 品牌:
    BIODEE
  • 货号

    产品规格

    售价

    备注

  • DE-P2023-1mL

    1mL

    ¥4300.00

    分子诊断试剂盒 U

产品描述

产品名称:PicoGreen 

产品货号:DE-P2023 

产品规格:1 mL

储存条件:4℃ 避光保存,推荐条件下可储存 6 个月。

产品参数:Ex/Em: 480/520 nm(结合 dsDNA)

产品介绍

  PicoGreen 是荧光检测dsDNA 并进行定量的一种产品,这种方法非常灵敏。常用于分子生物学技术:cDNA 文库的构建、亚克隆的DNA 片段纯化及应用,比如进行DNA 定量、产物扩增和引物的进一步检测。常规的DNA 含量的 检测方法是在260nm处测其吸光值。这种方法的主要缺点是核苷酸、单链核酸和蛋白质对信号的影响很大,并且还会受 到核酸制备过程中污染物的干扰,无法区分DNA和RNA, 而且这种方法不灵敏(5 μg/mL dsDNA溶液A260 = 0.1)。 PicoGreen 定量检测方法简单、方便,成为生物制品残留 DNA检测的标准。

  PicoGreen 只有与dsDNA 结合后才发出荧光,并且所发荧光强度与DNA浓度成正比。 PicoGreen 可以检测出 25pg/mL - 1000ng/mL 范围内的dsDNA,且线性关系较好 (R 2>0.99)。

使用方法

试剂制备

  PicoGreen dsDNA 定量试剂是以1 mL 的浓缩液形式保存在无水的DMSO(二甲基亚砜)中。实验时,配制操作溶液:2× PicoGreen试剂,将浓缩液用1×TE(10 mM Tris-HCl,1 mM EDTA,pH7.5)按1:200的比例稀释。对 于终体积为200 μL 的检测体系,如果要准备足够的操作溶 液测定20 个样品,可在2 mL 1× TE中加入10 μL PicoGreen dsDNA 定量试剂;对应终体积为2 mL 的检测体系,检测 20 个样品,则需要在20 mL 1× TE 中加入100 μL PicoGreen dsDNA 定量试剂。由于试剂容易吸附到玻璃表 面,要在塑料容器中配制。PicoGreen 试剂见光易降解, 因此要注意避光保存。

  溶液最好在配制好数小时内使用,以保证最佳结果。

实验方法

1.标准品工作液的配制:Sigma 小牛胸腺嘧啶DNA 干粉1 mg(Tris,Nacl等浓 度已成标准体系),加入1 mL 双蒸水,配制成1 mg/mL 的标  准液。

2.染料工作液的配置:5 μL PicoGreen 加入1 mL TE(注意:用1×TE将 PicoGreen 稀释200 倍,现用现配,注意避光)。

3.标准液稀释:

(1)母液稀释:取10 μL(1 mg/mL)标准液加入到990μL TE 溶液中,稀释成10 μg/mL,取10 μL(10 μg/mL)标准液加入到990 μL TE 溶液中,稀释成100 ng/mL

(2)倍比稀释:取800 μL(100 ng/mL)的标准液加入到 200 μL TE 溶液中,浓度为80 ng/mL,取500 μL(80 ng/mL) 的标准液加入到500 μL TE溶液中,  稀释到40 ng/mL;依次倍比稀释,配成20 ng/ml、10 ng/ml、5.0 ng/ml、2.5 ng/ml

4.标准曲线的制备:倍比稀释后的各梯度标准品溶液和染 料工作液各取100 μL 混匀,避光室温放置5 min。使用FB-15 型便携式荧光仪检  测样品的荧光值:将混合后的溶液加入微量比色皿,注意不要在样品中引入气泡,轻弹微量检测皿的外部,可以驱散气泡。以1×TE 缓  冲液为空白对照,测定样品和空白对照的荧光值;或者直接用96孔板进行荧光检测, 激发波长480 nm,发射波长520 nm,用标准品溶液  的浓度 (ng/ml)对应的荧光强度作直线回归,制备标准曲线。

5.测量待测样品的荧光值。根据制作的DNA 浓度的标准曲线,计算待测样品浓度。

注意事项

1.荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。

2.PicoGreen 工作液最好现配现用,以保证最佳结果。

3.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。