最近搜索:细胞培养 微生物学 分子生物 生物化学
河南快3彩票走势图>>试剂盒>>分子诊断试剂盒>>WonderBlue? High Sensitivity dsDNA Quantitation Kit
WonderBlue? High Sensitivity dsDNA Quantitation Kit
  • 产品货号:
    DE-W2011
  • 中文名称:
    WonderBlue? High Sensitivity dsDNA Quantitation Kit
  • 品牌:
    BIODEE
  • 货号

    产品规格

    售价

    备注

  • DE-W2011-200T

    200T

    ¥600.00

    分子诊断试剂盒 U

  • DE-W2011-1000T

    1000T

    ¥2400.00

    分子诊断试剂盒 U

产品描述

产品名称:WonderBlue? High Sensitivity dsDNA Quantitation Kit 

产品货号:DE-W2011 

产品规格:200T,1000T

储存条件:4℃避光保存,推荐条件下可储存 6 个月。

产品内容:

      blob.png

                   产品参数:Ex/Em: 485/530 nm ( 结 合 dsDNA ), 图 1 是 WonderBlue?的光谱图。

       blob.png

          图 1. 在 dsDNA 过饱和的条件下,WonderBlue?的激发 与发射光谱图。

产品介绍:WonderBlue? dsDNA 定量试剂盒(WonderBlue? High Sensitivity dsDNA Quantitation Kit)不同于常规的基于吸光 度的测量,这款试剂盒可以区分 dsDNA、ssDNA 或 RNA, 有选择性地检测 dsDNA(见图 2)。与传统 DNA 定量方法 相比,该产品具有检测范围广、高灵敏度、高特异性等优点。 试 剂 盒 主 要 包 含 WonderBlue? High Sensitivity dsDNA Quantitation Buffer, Enhancer solution 以及 pre-diluted dsDNA Standards 三个组分,可以在 200 μL 体系内定量 0.2-100 ng 的 dsDNA(见图 3)。此外,试剂盒还可以将其他污染物的 影响降低至最低,可以耐受常规污染物例如蛋白质,盐,有 机溶剂和洗涤剂等(见表 1),该试剂盒不具有细胞膜通透 性,没有细胞毒性和诱发突变性,对人体安全无害。

使用方法:

1.为了得到最佳结果,请使用精确校准的移液器和去 RNA 酶的枪头、试管以及检测板。建议检测时每个 DNA 标样和 未知样品都设定 3 个复孔。如果检测时不只一块 96 孔板, 建议每块 96 孔板都设定一条标准曲线,尽量减少检测板之 间的误差。

2.使用前,将产品从储存条件下取出恢复至室温。如果 100× Enchancer 储存液出现沉淀,可以 37℃水浴溶解。每个组分 应充分震荡或涡旋混匀、离心,以免造成不必要的试剂的损 耗。

3.每个待测样品对应 200 μL 的 WonderBlue 工作液。对于 一个 96 孔板,吸取 200 μL 100× Enchancer,加入到 20 mL Quantitation Solution 中,涡旋混匀,配置成 WonderBlue? 工作液,为得到最佳结果,工作液应在一小时内使用完毕。 如果将工作液重新储存并在 24 h 内使用,结果的准确性会有轻微损失。储存过程中,增强液可能会出现沉淀现象,可 以通过涡旋震荡使其重悬。

4.对于每个样品,吸取 200 μL 的工作液至黑色的 96 孔板 微孔中。为确保结果精确可靠,建议每个测试样品和 DNA 标样分别做平行的 3 个复孔,此过程也可以使用有精确量程 的移液排枪进行。黑色的检测板可以减少各测试样品间的荧 光干扰。

5.在 96 孔板微孔中,每孔加入 10 μL 的 dsDNA 标样或 1-20 μl 未知样品,并用移液器轻轻混匀。

6.将微孔板室温避光孵育 5-10 min,为得到最佳结果,孵 育结束后,应立即读取检测板。也可以在 6 h 内读取数据, 但结果的精确性会有轻微损失。

7.使用激发波长和发射波长在 485 nm 和 530 nm 处的酶标 仪测量荧光值。

8.制作一条标准曲线,计算检测样品的 DNA 浓度(见图 2)。 注:图 3 标准曲线仅供参考,您可以根据实际测得的数据自 制标准曲线,从而求算样品的浓度。

实验参考因素

1.对于要检测的植物或动物来源的 DNA 样本,小牛胸腺 DNA(Calf thymus DNA )常常作为制作 DNA 标样的参照物。 因为 Calf thymus DNA 具有双链结构、高度聚合,碱 基分配均匀(AT 含量 58 %,GC 42 %)。如果检测样品的荧 光值超过了标准曲线,那么需要将样品做进一步稀释处理。 为了保持结果的一致性,务必使每孔上样量均等,且不含有 其他高浓度的污染物。

河南快3彩票走势图 www.ofrzm.com 2.WonderBlue? High Sensitivity dsDNA 定量试剂盒可以测 量范围在 0.2-100 ng 的 dsDNA。对于一些不需要线性检测的样品,试剂盒检测范围可以扩展至 200 ng。如需检测更低 含量的样品,您可以将 DNA 标样用 1×TE 缓冲液作进一步 的稀释,浓度可以稀释到 0.02 ng/μL,然后按照常规程序每孔 10 μL 上样。

3.对于不同种类的检测仪器,您可以优化仪器设置,以获 取最佳线性度。一些可能会影响最终线性度和相对荧光强度的因素有:(1)激发和发射波长与带宽;(2)截止型滤波器;(3)灵敏度设置;(4)移液的准确性;(5)微孔板制造商

4.表 1 详细列出了几种常见的 DNA 污染物,如盐、溶剂、洗涤剂和蛋白质等。

           blob.png

                                    dsDNA(ng /μL)

  图2. 使用WonderBlue? High Sensitivity dsDNA 定量试剂盒 检测不同类型核酸得到的相对荧光强度。

              blob.png

          图 3. 使用 WonderBlue? Hig Sensitivity dsDNA 定量试剂盒 制作的 calf thymus

          DNA 标准曲线(Ex/Em 485/530),左上角插图显示了低浓度 DNA 样本测定的曲线图。


          表 1. 常见的 DNA 污染物对 WonderBlue? High Sensitivity dsDNA 定量试剂盒的影响

       blob.png

  三份 dsDNA 平行样品的标准曲线,分别在上述含有指定浓度污染物的条件下(初始浓度进行检测,“Pass”指与没有污染物的体系相比较,实验结果变化范围<20%。所CTP, dGTP, dTTP 的混合物有样品用 Molecular Devices Gemini XS 酶标仪在 485 nm 处激发,在 530 nm 处测荧光强度?!?Pass *”指由此条件测得的标准曲线有少许变动。 “dNTPs**”指 dATP, d。