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RIPA组织/细胞裂解液
  • 产品货号:
    DE5012
  • 中文名称:
    RIPA组织/细胞裂解液
  • 品牌:
    BIODEE
  • 货号

    产品规格

    售价

    备注

  • DE5012-100ml

    100ml

    ¥160.00

    蛋白提取与纯化

产品描述

货号:DE5012
规格:裂解液100ml,PMSF 1.5ml
          本产品配有 PMSF(100mM)
保存:RIPA 裂解液 4℃保存,PMSF -20℃保存。
产品简介:RIPA 组织/细胞裂解液是利用表面活性剂等来裂解细胞膜(包括核膜)。本试剂提取的蛋白为可溶性总蛋白。
使用说明
     如发现 RIPA 有沉淀,请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。
根据使用量,取每 1ml RIPA 加入 10ul PMSF,使 PMSF 的最终浓度为 1mM,混匀备用(PMSF 现用现加)。
1、样品前处理:
a)对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入 150-250ul 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞:离心收集细胞,按照 6 孔板每孔细胞量加入 150-250ul 裂解液的比例加入裂解液,用手指轻弹悬浮细胞以充分裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成 5-10×105细胞/管,然后再裂解。
c)对于组织样品:把组织剪切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250ul 裂解液的比例加入裂解液(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量) 。用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
2、后处理:
将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Westernblotting 和免疫沉淀等操作。
注意事项
1、 使用本裂解液可以裂解细胞核,释放出核蛋白的同时,也会将基因组一并释放出来,造成细胞裂解液粘稠,此时可以直接加入蛋白上样缓冲液煮沸再离心,离心后直接上样电泳;若想测定浓度,可入加少量 SDS(1%),煮沸后离心测浓度。
2、 本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污剂,所以不适合使用 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒,请选择BCA 法或者 Lowry 法检测蛋白浓度。
3、 如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散粘稠状物,随后离心取上清用于后续实验。
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